1、將益生菌接種至低酸性培養基中，接種比例為10-20％；益生菌菌種包括植物乳桿菌、瑞士乳桿菌、嗜酸乳桿菌、長雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌以及短雙歧桿菌。
2、將步驟1中活化后的菌種接種至低酸性培養基進行劃線培養，選取過渡優勢菌種；
3、將過渡優勢菌種接種至高酸性培養基中進行培養，接種比例10-20％；
4、將3中產物接種至高酸性培養基進行劃線培養，選取耐酸優勢菌種；
5、將耐酸優勢菌種接種至高酸性培養基中，進行增殖培養，接種比例為5％，得到增殖的菌液；
6、取一定體積的上述增殖菌液在4℃，6000r/min的條件下離心15min后，收集沉淀；相同離心條件下，將沉淀用無菌生理鹽水離心洗滌2次，得菌泥；
7、將制備的菌泥用相同體積的生理鹽水重懸，制成菌懸液，按照每100ml菌懸液添加紅糖10-15g、脫脂乳粉10-15g、月見草油3-6g、麥芽糊精10-20g，混合均勻；
8、將步驟7制得的菌懸液放進益生菌凍干機設備進行真空冷凍干燥，制得益生菌凍干粉，密封包裝。
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